Fare Siyatik Sinirlerinde NAD + ve Metabolitlerinin Miktar Tayini

Giriş

Nikotinamid adenin dinükleotidinin (NAD +) önemli kısımları ve yaşlanma ve nörodejenerasyondaki metabolitleri yaygın olarak kabul edilmiştir. Yaşlanma ve nörodejeneratif hastalıkları hedef alan biyokimyasal araştırma ve müdahalelere yönelik ilerlemeyi teşvik etmek için, NAD + ve NAD + kurtarma yolundaki metabolit seviyelerini doğru bir şekilde ölçmek büyük önem taşımaktadır. Burada, normal ve yaralı fare siyatik sinirinde NAD + ve metabolit seviyelerini ölçmek için sağlam ve doğru bir LC-MS/MS yöntemi uygulanmaktadır.

NAD + ve metabolitlerini ölçmek için mevcut yöntemlerin sınırlamaları

HPLC-UV, NMR, kılcal bölge elektroforezi veya kolorimetrik enzimatik tahliller gibi NAD + ve metabolitlerini ölçmek için geleneksel yöntemler, duyarlılık, seçicilik ve dolaylı ölçümde çeşitli zorluklarla karşı karşıyadır. Hücresel veya doku NAD + ve metabolitleri ölçümleri için mevcut LC-MS/MS tahlillerine gelince, uzun çalışma süreleri, zayıf kromatografik tutma davranışı ve tatmin edici olmayan tepe şekilleri gibi üstesinden gelinmesi gereken birçok zorluk vardır. Ayrıca, NAD + kurtarma yolundaki yalnızca bir ila üç madde bu yöntemlerle kapsanabilir.

LC-MS/MS yönteminin modifikasyonları

Mevcut LC-MS/MS tahlilleri temelinde, kromatografik koşullar, vekil matris ve MS/MS koşulları ile ilgili modifikasyonlar gerçekleştirilir. Spesifik olarak, mobil faz katkı maddesi olarak 5 μM metilen fosfonik asit kullanılır, bu da sinyal yoğunluğunu ve tepe şeklini açıkça destekler. Hiç numune alınmayan numunelerin nispeten temiz ve basit doğası ve küçük boyutları göz önüne alındığında, ultra saf su, ikame matris olarak test edilir. Hidrofilik etkileşim sıvı kromatografi kolonu ve hiperkarbonhidrat kolonu yerine, benzersiz MaxPeak HPS yüksek performanslı yüzey teknolojisi (kolon iç duvarını pasifleştirme, metal yüzeyi ortadan kaldırma) tüm analitlerin yüksek tekrarlanabilirliğini, tepe simetrisini ve temel ayrımını sağlayan Waters Atlantis Premier BEH C18 AX kolonu kullanılır.Ayrıca, MS koşulları, cADPR ve nikotinamid mononükleotidin (NMN) tepkisini korurken döngüsel adenozin difosfat riboz (cADPR) kanalındaki NAD + parazit sinyalini en aza indirmek için optimize edilmiştir, iyon püskürtme voltajı için 4000V, turbo ısıtıcı sıcaklığı için 450 ° C, Gaz 1 için 50 psi, Gaz 2 için 50 psi, perde gazı için 30 psi ve çarpışma gazı için 12 psi.

Sinir örneklerinin temsili kromatogramı (normal ve yaralı)

Beş analitin tümü, cADPR'nin nörodejenerasyon modelinde hassas bir biyobelirteç olduğu temel ayrımı elde eder. Burada, siyatik sinir aksotomisi aksonal dejenerasyona neden olur, bu da yaralı sinirlerde NAD + seviyesinin düşmesine ve NMN seviyesinin yükselmesine neden olarak NMN / NAD + oranında yaklaşık 2 kat artışa neden olur. Eşzamanlı olarak, nikotinamid (NAM) ve adenozin difosfat riboz (ADPR) seviyeleri yaklaşık 2 kat azalırken, cADPR seviyesi 8 kattan fazla artar. Bu sonuçlar, daha önce bildirilen araştırmaların sonuçlarıyla tutarlıdır ve bu modifiye LS-MS/MS yönteminin NAD + ve metabolitlerini ölçmede doğruluğunu doğrulamaktadır.

Son

Bu modifiye edilmiş LC-MS/MS yöntemi, 5 dakikalık kısa bir çalışma süresi içinde NAD +, NMN, NAM, ADPR ve cADPR'nin etkili bir başlangıç ayrımını sağlar, bu da çeşitli nörolojik bozuklukların erken teşhisine ve yaşlanma ve nörodejeneratif hastalıklar için ilaç geliştirilmesine katkıda bulunur.

Referans

Ma Y, Deng L, Du Z. Farelerde siyatik sinirlerde NAD + ve ilgili metabolitleri ölçmek için bir LC-MS / MS yönteminin geliştirilmesi ve doğrulanması ve bunun bir sinir yaralanması hayvan modeline uygulanması. J Kromatogr A. doi:10.1016/j.chroma.2024.464821

BONTAC NAD

BONTAC (BONTAC) 2012 yılından bu yana, kendine ait fabrikalar, 170'in üzerinde küresel patent ve güçlü Ar-Ge ekibi ile koenzim ve doğal ürünler için hammaddelerin Ar-Ge, üretim ve satışına kendini adamıştır. BONTAC, biyosentezinde zengin Ar-Ge deneyimine ve ileri teknolojiye sahiptir. NAD ve öncüleri (örn. NMN ve NR). NAD ER Derecesi (endoksin giderme), NAD Derece I (IVD / diyet takviyesi / kozmetik ham tozu), NAD Derece II (API / ara ürünler) ve NAD Derece IV'ü kapsayan çeşitli NAD türleri vardır (çözünürlük üzerinde daha yüksek bir gereksinim varsa), liyofilize toz veya kristal toz şeklinde sağlanabilir. BONTAC NAD'ın saflığı %98'in üzerine çıkabilir.

Feragatname

Bu makale akademik dergide yer alan atıflara dayanmaktadır. İlgili bilgiler yalnızca paylaşım ve öğrenme amaçlıdır ve herhangi bir tıbbi tavsiye amacını temsil etmez. Herhangi bir ihlal varsa, lütfen silinmesi için yazarla iletişime geçin. Bu makalede ifade edilen görüşler BONTAC'ın tutumunu temsil etmemektedir. BONTAC hiçbir koşul altında, bu web sitesinde yer alan bilgi ve materyallere doğrudan veya dolaylı olarak güvenmenizden kaynaklanan veya bunlardan kaynaklanan herhangi bir talep, zarar, kayıp, masraf veya maliyetten hiçbir şekilde sorumlu veya yükümlü tutulamaz.