Giriş
Nikotinamid adenin dinükleotidin (NAD+) ve metabolitlerinin yaşlanma ve nörodejenerasyondaki önemli kısımları geniş çapta kabul görmüştür. Yaşlanmayı ve nörodejeneratif hastalıkları hedef alan biyokimyasal araştırma ve müdahalelere doğru ilerlemeyi teşvik etmek için, NAD+ kurtarma yolundaki NAD+ ve metabolit seviyelerini doğru bir şekilde ölçmek büyük önem taşımaktadır. Burada, normal ve yaralı fare siyatik sinirindeki NAD+ ve metabolit seviyelerini ölçmek için sağlam ve doğru bir LC-MS/MS yöntemi uygulanır.
NAD+ ve metabolitlerini ölçmek için mevcut yöntemlerin sınırlamaları
NAD+ ve metabolitlerini ölçmeye yönelik HPLC-UV, NMR, kılcal bölge elektroforezi veya kolorimetrik enzimatik analizler gibi geleneksel yöntemler duyarlılık, seçicilik ve dolaylı ölçüm açısından çeşitli zorluklarla karşı karşıyadır. Hücresel veya doku NAD+ ve metabolit ölçümleri için mevcut LC-MS/MS testlerine gelince, uzun çalışma süreleri, zayıf kromatografik tutma davranışı ve tatmin edici olmayan tepe şekilleri gibi üstesinden gelinmesi gereken birçok zorluk vardır. Ayrıca, NAD+ kurtarma yolundaki yalnızca bir ila üç madde bu yöntemlerle kapsanabilir.
LC-MS/MS yönteminin modifikasyonları
Mevcut LC-MS/MS tahlilleri temelinde, kromatografik koşullar, vekil matris ve MS/MS koşulları ile ilgili değişiklikler yapılır. Spesifik olarak, sinyal yoğunluğunu ve tepe şeklini açıkça destekleyen mobil faz katkı maddesi olarak 5 μM metilen fosfonik asit kullanılır. Hiç numune almayan numunelerin nispeten temiz ve basit doğası ve küçük boyutları göz önüne alındığında, ultra saf su, ikame matris olarak test edilir. Hidrofilik etkileşimli sıvı kromatografi kolonu ve hiperkarb kolonu yerine, benzersiz MaxPeak HPS yüksek performanslı yüzey teknolojisi (kolon iç duvarını pasifleştirme, metal yüzeyi ortadan kaldırma) tüm analitlerin yüksek tekrarlanabilirliğini, tepe simetrisini ve temel ayrımını sağlayan Waters Atlantis Premier BEH C18 AX kolonu kullanılır. Ayrıca, MS koşulları, iyon püskürtme voltajı için 4000V, turbo ısıtıcı sıcaklığı için 450°C, Gaz 1 için 50 psi, Gaz 2 için 50 psi, perde gazı için 30 psi ve çarpışma gazı için 12 psi ile cADPR ve nikotinamid mononükleotidinin (NMN) tepkisini korurken siklik adenozin difosfat riboz (cADPR) kanalındaki NAD+ girişim sinyalini en aza indirecek şekilde optimize edilmiştir.
Sinir örneklerinin temsili kromatogramı (normal ve yaralı)
Beş analitin tümü, cADPR'nin nörodejenerasyon modelinde hassas bir biyobelirteç olduğu temel ayırmayı başarır. Burada, siyatik sinir aksotomisi aksonal dejenerasyonu indükleyerek yaralı sinirlerde NAD+ seviyesinin düşmesine ve NMN seviyesinin yükselmesine yol açarak NMN/NAD+ oranında yaklaşık 2 kat artışa neden olur. Eş zamanlı olarak nikotinamid (NAM) ve adenozin difosfat riboz (ADPR) seviyeleri yaklaşık 2 kat azalırken, cADPR seviyesi 8 kattan fazla artar. Bu sonuçlar, daha önce bildirilen araştırmaların sonuçlarıyla tutarlıdır ve bu değiştirilmiş LS-MS/MS yönteminin NAD+ ve metabolitlerinin ölçülmesindeki doğruluğunu doğrulamaktadır.
Son
Bu modifiye edilmiş LC-MS/MS yöntemi, NAD+, NMN, NAM, ADPR ve cADPR'nin 5 dakikalık kısa bir çalışma süresi içinde etkili bir şekilde temel olarak ayrılmasını sağlar ve bu da çeşitli nörolojik bozuklukların erken teşhisine ve yaşlanma ve nörodejeneratif hastalıklar için ilaç geliştirilmesine katkıda bulunur.
Referans
Ma Y, Deng L, Du Z. Farelerin siyatik sinirlerinde NAD+ ve ilgili metabolitlerin ölçülmesi için bir LC-MS/MS yönteminin geliştirilmesi ve doğrulanması ve bunun bir sinir yaralanması hayvan modeline uygulanması. J Kromatogr A. doi:10.1016/j.chroma.2024.464821
BONTAC NAD
BONTAC, 2012'den beri koenzim ve doğal ürünler için hammaddelerin Ar-Ge, üretim ve satışına adanmıştır, kendi kendine ait fabrikaları, 170'den fazla küresel patenti ve güçlü Ar-Ge ekibi ile. BONTAC, NAD ve öncüllerinin biyosentezinde zengin Ar-Ge deneyimine ve ileri teknolojiye sahiptir (örn. NMN ve NR). NAD ER Sınıfı (endoksin giderimi), NAD Sınıf I (IVD/diyet takviyesi/kozmetik ham tozu), NAD Sınıf II (API/ara ürünler) ve NAD Derece IV'ü (çözünürlük konusunda daha yüksek bir gereklilik varsa) kapsayan, liyofilize toz veya kristal toz formunda sağlanabilen seçilecek çeşitli NAD türleri vardır. BONTAC NAD'ın saflığı %98'in üzerine çıkabilir.
Feragatname
Bu makale akademik dergideki referansa dayanmaktadır. İlgili bilgiler yalnızca paylaşım ve öğrenme amaçlıdır ve herhangi bir tıbbi tavsiye amacını temsil etmez. Herhangi bir ihlal varsa, lütfen silinmesi için yazarla iletişime geçin. Bu makalede ifade edilen görüşler BONTAC'ın pozisyonunu temsil etmemektedir. BONTAC hiçbir koşulda, bu web sitesindeki bilgi ve materyallere güvenmenizden doğrudan veya dolaylı olarak kaynaklanan veya ortaya çıkan herhangi bir talep, zarar, kayıp, masraf veya maliyetten hiçbir şekilde sorumlu veya yükümlü tutulamaz.