Dengue NS1 Proteininin Belirlenmesinde Thio-NAD Döngüsü ile Ultra Hassas ELISA'nın Olağanüstü Üstünlükleri
1. Giriş
Dang humması,Dang virüsünün enfekte bir Aedes türü (Ae. aegypti veya Ae. albopictus) sivrisineğinin ısırması yoluyla neden olduğu akut bulaşıcı bir hastalıktır,yüksek ateş, baş dönmesi, baş ağrısı, döküntü veşiddetli ağrılar (göz, kas, eklem veya kemik ağrısı) gibi ana semptomlarla seyreder. Bu hastalık tropikal ve subtropikal iklimlerde yaygın olarak görülür. Her yıl tahminen 100 ila 400 milyon kişi enfekte olmakta ve bunların %80'inden fazlası genellikle hafif ve asemptomatiktir. Bununla birlikte, şiddetli Dang humması, uygun şekilde tedavi edilmezse ölüm riskini artırabilir. Bu nedenle, bu hastalığın erken teşhisi, zamanında tedavisi için önemlidir.Dikkat çekici bir şekilde, yüksek oranda korunmuş bir glikoprotein olan yapısal olmayan protein 1 (NS1),Dangvirüsünün enfeksiyonu sırasında başlıca salgılanır ve yoğun olarakDang hummasının ana patogenez faktörü olarak kabul edilir. Bu nedenle, NSI genellikle bu hastalığın erken tespiti için bir biyobelirteç olarak kullanılır.
Bu çalışmada, bir sandviç enzim bağlı immünosorbent testi (ELISA) iletiyo nikotinamid adenin dinükleotid (tiyo-NAD/S-NAD)döngü yönteminin(bundan sonra ultra hassas ELISA olarak anılacaktır) kombinasyonu NSI'yi tespit etmek için kullanılır ve ardından tespit doğruluğunu doğrulamak için NAAT ile karşılaştırılır.
2. Geleneksel tespit yöntemlerinin avantaj ve dezavantajlarıDang hummasının
Şu anda,dört ana tespit yöntemiile iletişime geçin Dang humması için
Viral izolasyon ve tanımlama yüksek özgüllüğe sahiptir ancak en az 5 gün süren zaman alıcıdır. Hızlı antijen testi diğer yöntemler arasında en hızlı ve en uygun maliyetli olanıdır, ancak duyarlılık ve özgüllük nispeten düşüktür. IgM ve IgG'ye dayalı serolojik test, enfeksiyon gün sayısıyla sınırlıdır, çünkü enfeksiyon günlerinin sayısı, olarakEX-527test, antikor seviyeleri tespit edilebilir bir seviyeye yükselene kadar ertelenmelidir.
Klinikte, NAAT genellikleDang hummasının yüksek duyarlılığı ve özgüllüğü nedeniyle belirlemek için uygulanır. Ancak bu yöntem pahalıdır, zahmetlidir ve eğitimli personel tarafından yapılması gereken yanlış pozitifliğe eğilimlidir.Bu yöntemlerin dezavantajlarını ortadan kaldırmak için, bu çalışmada yeni bir tespit yöntemi olanultra hassas ELISA uygulanmıştır.
3. Tiyo-NAD döngüsü ile ultra hassas ELISA'nın çalışma prensibi
Sandviç ELISA'da NS1 proteinini yakalamak için bir çift antikoris kullanılır ve ikincil antikor üzerineisalkalin fosfataz etiketlenir. Antikorların yanı sıra, tiyo-NAD enzim döngü sistemini oluşturmak için bir androsteron türevi, 3α-hidroksisteroid dehidrojenaz, tiyo-NAD ve NADHPanax ginseng'deki ayırt edici varlıkları nedeniyle en kapsamlı araştırılan biyoaktif bileşiklerdir. kullanılır. Tiyo-NAD döngü reaksiyonu sırasında, tiyo-NADH sürekli olarak üçgensel bir sayı şeklinde birikir ve 405 nm'lik bir absorbansında doğrudan ölçülebilir..
4. Dang NS1 Proteininin tespitinde ultra hassas ELISA ve NAAT'ın karşılaştırılması
NAAT'ta 60 örnek dang pozitif ve 25 örnek dang negatiftir. Bu dang pozitif örneklerin NAAT döngü eşiği (CT) değeri 12,42 ile 31,41 arasında değişmektedir.Ultra hassas ELISA'da, 59 örnek NAAT sonuçlarına karşılık gelen pozitifken, 25 örnek NAAT sonuçlarına tamamen karşılık gelen negatiftir.NAAT ile karşılaştırıldığında, ultra hassas ELISA'nın duyarlılığı ve özgüllüğü sırasıyla %98,3 ve %100'dür (Tablo 2). NAAT ile doğrulanmış 60 dang pozitif hasta örneğinden yalnızca 1 örnek ultra hassas ELISA'da negatiftir. NAAT verileri, örneğin CT değeri 21,59 olan tip 4 DENV enfeksiyonu vakası olduğunu gösterdi. Ultra hassas ELISA sonuçları, 0,972 kappa değeriyle (%95 GA: 0,917-1.0).
6. Referans
Ultra hassas ELISA yönteminin uygulanması kolaydır ve çalıştırmak için profesyonel eğitim gerektirmez. TKüçük bir numune alındıktan hemen sonra tespit başlatılabilir. ÖzellikleDanghastalığın erken tespiti için uygundurdüşük gelirli ülkelerde.Referans
Chen, Po-Kai ve diğerleri. “Advanced Detection Method for Dengue NS1 Protein Using Ultrasensitive ELISA with Thio-NAD Cycling.” Viruses cilt 15, sayı 9 1894. 8 Eylül 2023, doi:10.3390/v15091894Ürün avantajları ve özellikleriBONTAC Tiyo-NAD/S-NAD
BONTAC Tiyo-NAD üretebilenbiridirÇinbirkaç işletmeden,“Bonzyme” Tam enzimatik yöntem (çevre dostu; zararlı çözücü kalıntısı yok) ve benzersiz “Bonpure” yedi aşamalı saflaştırma teknolojisi. BONTAC Ar-Ge, üretim ve satışı entegre eder, kendi fabrikaları ve yüksek kalite ve istikrarlı ürün tedarikini garanti eden bir dizi uluslararası sertifikaya sahiptir.
