Dengue NS1 Proteininin Belirlenmesinde Thio-NAD Döngüsü ile Ultra Hassas ELISA'nın Olağanüstü Avantajları
1. Giriş
Deng ateşi, akut bir bulaşıcı hastalıktır.Deng virüsü enfekte bir Aedes türü (Ae. aegypti veya Ae. albopictus) sivrisineklerinin ısırığı yoluyla,ana semptomları yüksek ateş, baş dönmesi, baş ağrısı, döküntü veşiddetli ağrılar (göz, kas, eklem veya kemik ağrısı) vb. Bu hastalık tropikal ve subtropikal iklimlerde yaygın olarak yaygındır. Her yıl tahmini 100 ila 400 milyon kişi enfekte oluyor ve genellikle %80'den fazlası hafif ve semptomatsızdır. Buna rağmen, şiddetli Dengue ateşi doğru tedavi edilmezse ölüm riskini artırabilir. Bu nedenle, hastalığın erken teşhisi, zamanında tedavisi için önemlidir.Dikkat çekici bir şekilde, yapısal olmayan protein 1 (NS1), yüksek korunan bir glikoprotein olup, esas olarak enfeksiyon sırasında salgılanırDengVirüs, bu da yoğun şekilde ana patogenezi faktörü olarak kabul edilirDeng ateşi. Bu nedenle, NSI genellikle bu hastalığın erken tespiti için bir biyobelirteç olarak kullanılır.
Bu çalışmada, sandviç enzimine bağlı bir immünosorbent testi (ELISA) ile birliktethio nikotinamid adenin dinukleotid (thio-NAD/S-NAD)Bisiklet yöntemi (bundan sonra ultra hassas ELISA olarak adlandırılır) NSI'yı tespit etmek için kullanılır ve ardından NAAT ile karşılaştırılır ve tespit doğruluğu doğrulanır.
2. Geleneksel tespit yöntemlerinin avantajları ve dezavantajlarıDeng ateşi
Şu anda, tİşte dört ana tespit yöntemiiçin Deng ateşi.
Viral izolasyon ve tanımlama yüksek özgüllüklere sahiptir ancak zaman alıcıdır ve en az 5 gün sürer. The hızlı antijen test, diğer yöntemler arasında en hızlı ve en maliyet verimli olanıdır, ancak hassasiyet ve özgüllük nispeten düşük. IgM ve IgG tabanlı serolojik testler ise şu sınırlamalarla sınırlıdır enfeksiyon günleri sayısı, şu şekildetheTest antikor seviyesine kadar ertelenmelidir algılanabilir bir seviyeye yükselir.
Klinikte, NAAT genellikle belirlenirDeng ateşi Yüksek hassasiyeti ve özgüllüğü nedeniyle bu durum önemlidir. Ancak bu yöntem pahalı, zahmetlidir ve yanlış pozitifliğe yatkındır; bu durum eğitimli personel tarafından yapılması zorundadır.Bu yöntemlerin dezavantajlarını aşmak için yeni bir tespit yöntemiUltra hassas ELISA bu çalışmada başvuru yaptı.
3. Thio-NAD döngüsüyle ultra hassas ELISA iş akışı
Bir çift antikoris ELISA sandviçinde NS1 proteinini yakalamak için ve alkalin fosfataz kullanılıris ikincil antikorda etiketlenmiştir. Antikorların yanı sıra, androsteron türevi olan 3α-hidroksisteroid dehidrojenaz, tio-NAD ve NADHare tiyo-NAD enzim döngüsü sisteminin oluşturulmasında kullanılmıştır. Tiyo-NAD döngüsü reaksiyonu sırasında, tiyo-NADH sürekli olarak üçgen sayı şeklinde birikirdi ve doğrudan 405 nm emilimle ölçülebilirdi.
4. Dengue NS1 Proteini tespitinde ultra duyarlı ELISA ve NAAT'ın karşılaştırılması
NAAT'ta 60 örnek dengue pozitif, 25 örnek ise dengue negatif. Bu dengue-pozitif örneklerin NAAT döngü eşiği (BT) değeri 12.42 ile 31.41 arasında değişiyordu.Ultra hassas ELISA'da, 59 örnek NAAT sonuçlarına uygun olarak pozitifken, 25 örnek tamamen NAAT sonuçlarına karşılık olarak negatiftir.NAAT ile karşılaştırıldığında, ultrasensitif ELISA'nın hassasiyeti ve özgüllüğü sırasıyla %98,3 ve %100'dür (Tablo 2). NAAT ile doğrulanmış 60 dengue pozitif hasta örneğinden sadece 1 örnek ultrasensitif ELISA'da negatiftir. NAAT verileri, örneğin tip 4 DENV enfeksiyonu vakası olduğunu ve BT değerinin 21.59 olduğunu gösterdi. Ultrasensitif ELISA sonuçları NAAT sonuçlarıyla neredeyse tamamen uyumludur ve kappa değeri 0.972'dir (%95 GA: 0.917-1.0).
5. Sonuç
UYoğun ELISA yöntemi uygulaması kolaydır ve profesyonel stajyerlerin kullanılmasını gerektirmez. TKüçük bir örnek alındıktan hemen sonra tespit başlatılabilir. Özellikle erken tespit için uygundur;DengHastalık düşük gelirli ülkeler.Referans
Chen, Po-Kai ve ark. "Ultra Hassas ELISA ile Thio-NAD Döngüsü Kullanarak Dengue NS1 Proteini için İleri Tespit Yöntemi." Virüsler, cilt 15,9, 1894. 8 Eylül 2023, doi:10.3390/v15091894Ürün avantajları ve özellikleriBONTAC Thio-NAD/S-NAD
BONTAC oBirkaç işletmeden biriÇin Thio-NAD üretebilen, ile"Bonzyme" Tam enzimatik yöntem (çevre dostu; zararlı çözücü kalıntıları yok) ve benzersiz "Bonpure" yedi adımlı arıtma teknolojisi. BOLTAC, Ar-Ge, üretim ve satışı kendi fabrikaları ve yüksek kalite ve istikrarlı ürün tedarikini sağlamak için birçok uluslararası sertifika.
